NNNS NNSNN N埃及基础与应用科学杂志5（2018）183完整文章6-（2-吗啉代乙基）-噻唑并[3，2-a]嘧啶-5-酮：合成潜在的PI 3 kα抑制剂的新型支架艾哈迈德河埃曼？阿里作者：El-Bendary，Mariam A.作者：Ghaly J.Ihsan A.ShehataMansoura大学药学院药物化学系，Mansoura35516，埃及阿提奇莱因福奥文章历史记录：2017年11月1日收到2018年2月6日收到修订版，2018年在线提供2018年关键词：噻唑并嘧啶酮磺酰胺抗癌评价mTORPI3kaA B S T R A C T本研究涉及的发展，某些噻唑并[3，2-a]嘧啶-5-酮通过乙烯桥连接使用NCI抗肿瘤筛选对新合成的化合物4目标化合物对肾癌细胞UO-31的生长促进作用为52.72比较分析显示化合物4a和4b显示出与雷帕霉素（mTOR抑制剂）的高相关性水平对化合物4a和4b在mTOR和结构相关的PI3Ka上进行激酶测定。 它们对PI3K α表现出中等活性，IC50值分别为120和151μ M。化合物因此，图4a和4b可以被认为是用于进一步开发潜在的PI3Ka抑制剂的有前景的领先支架。©2018曼苏拉大学。由Elsevier B.V.制作和托管。这是一篇开放获取的文章，CC BY-NC-ND许可证（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。1. 介绍稠合噻唑类化合物是一类重要的化合物，因其具有良好的生物活性和药理活性而备受关注一些出版物指出了稠合噻唑化合物的抗肿瘤活性例如噻唑并[5，4-c]吡啶-4（5H）-酮[1]和噻唑并[3，2-a]嘧啶衍生物[2根据这些调查结果，我们继续努力，OR1R2（一）OR1R2（二）合成抗癌生物活性化合物[6，7]，我们开始对一系列在3-，6-和7-位具有各种取代基的噻唑并[3，2-a]嘧啶-5-酮衍生物的评价感兴趣，旨在鉴定有效的抗癌剂。磷酸肌醇3-激酶（PI 3 K）途径是一种细胞内信号传导途径，在细胞存活、增殖和分化中具有调节作用，在肿瘤发生中具有关键作用[8，9]。在癌症中，多项研究已经研究了PI 3 K通路的治疗靶向，并且已经开发了靶向PI 3 K及其亚型、蛋白激酶B/AKT和哺乳动物雷帕霉素靶标（mTOR）的多种抑制剂[8]。美国专利报道了式I和II的被吗啉环取代的噻唑并嘧啶化合物，其具有抗癌活性，并且更具体地具有PI3激酶抑制活性。这些化合物可以抑制哺乳动物的肿瘤生长，治疗癌症患者[10]。以上述化合物为先导，本文进行的部分研究涉及在通式结构（A）的单个分子框架中将吗啉代烷基部分与噻唑并[3，2-a]嘧啶-5-酮系列组合，希望通过抑制PI 3 K发现感兴趣的抗肿瘤活性通常引入吗啉环以提高水溶性。该基团通过烷基链连接，以便从结合位点突出并暴露于周围的水性环境[11]。RO ONNS N CH3*通讯作者。电子邮件地址：mariamaghaly2@yahoo.com，mariamaghaly@mans.edu.eg（硕士）Ghaly）。（一）https://doi.org/10.1016/j.ejbas.2018.02.0012314- 808 X/©2018曼苏拉大学。由爱思唯尔公司制作和主持这是一篇基于CC BY-NC-ND许可证的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。可在ScienceDirect上获得目录列表埃及基础与应用科学杂志杂志主页：www.elsevier.com/locate/ejbas184A.R. Ali等 /埃及基础与应用科学杂 志 5（2018）183-189此外，有充分证据表明，芳基/杂芳基磺酰胺（其中-SO2 NH2基团的氮是游离的或取代的）在体外和/或体内显示出显著的抗肿瘤活性[12E-7010[14]和vemurafenib（PLX 4032）[15]（包含磺酰胺部分的稠合杂环化合物）的发现强调了磺酰胺作为一类重要的抗癌剂的作用，这些抗癌剂与各种不同的细胞靶点相互作用。此外，一系列含有苯磺酰胺基团并引入苯醌[16]、喹唑啉-2-酮[17]或香豆素[18]的新型化合物已显示出有希望的抗癌活性。鉴于前述信息，设想构建一种在单一分子框架（B）中组合噻唑并[3，2-a]嘧啶-5-酮和磺酰胺的系统，以探索其抗癌活性的累加效应H O2SN R'RR'=COCH， C（ NH） NH发展治疗计划（DTP）。该筛选的操作利用60种不同的人类肿瘤细胞系，代表白血病、黑色素瘤和肺癌、结肠癌、脑癌、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌和肾癌。通常基于其向NCI小分子化合物集合增加多样性的能力来选择用于筛选的结构。基于计算机辅助设计的具有药物样特性的化合物将在NCI筛选服务中优先考虑。提交给NCI 60细胞筛选的所有化合物最初在全NCI 60细胞组中以单次高剂量（10- 5M）进行测试。以单一浓度（10- 5 M）加入化合物，培养48小时。用蛋白结合染料磺酰罗丹明B测定终点[23所有供试化合物在整个细胞系组中的平均生长百分比和最敏感细胞系的生长百分比见表1。根据NCI的结果，可以考虑以下几点关于对表1中的单个细胞系的敏感性，所有目标化合物4- 6通过比较不同系列的结果，发现在化合物2. 结果和讨论2.1. 化学3 2（B）化合物6a_c中的磺胺胍取代值得一提的是，化合物4-癌合成设计的化合物4-6（a-c）的一般方法2-氨基-4-芳基噻唑蒂埃里被允许与苯甲酰甲基卤在室温下反应2-3分钟，得到相应的芳基噻唑。Thereaction of 2a–c with乙酰基-C-丁内酯在三氯氧磷中的溶液得到6-（2-甲基-3-（2-甲基-4-氧代-3-氧代-4-氧代-5-氧代-4-氧代-5-氧代-4氯乙基）-7-甲基-3-（未）取代苯基-5H-噻唑并[3，2-a]嘧啶-5-酮将化合物所合成的化合物4-6（a-c）的结构经微量分析和光谱数据（IR，1HNMR，13CNMR和EI-MS）证实，与它们的结构完全一致。在化合物4a-c的1H NMR谱在化合物4a的~（13）C NMR谱中，在53.16和66.15ppm处出现新的谱带，分别归属于（（CH2）2N-吗啉）和（（CH2）2O-吗啉）。 对于com-化合物在化合物5a的预期区域观察到了NMR谱和COCH3和COCH3的13C信号化合物6a中胍部分的13C信号在159.23ppm处观察到合成的化合物4-6（a-c）的质谱数据2.2. 生物学评价2.2.1. 体外抗癌筛选将目标化合物42.2.2. 比较分析我们对化合物4-6（a-c）进行了比较[26]分析，以研究它们的细胞毒性模式（平均图指纹）与已知抗癌标准剂、NCI活性合成化合物和天然提取物的细胞毒性模式（平均图指纹）的相似性，这些化合物存在于公共可用的数据库中。如果数据模式与属于标准试剂数据库的化合物的数据模式良好相关（Pearson另一方面，如果活性模式与任何标准药物不相关，则该化合物可能具有新的作用机制在GI50水平进行标准比较分析已确定化合物4a和4b显示出与雷帕霉素（NSC S226080）的高相关性水平，PCC值分别为0.607和0.629。注意到化合物4c、5a、5b、5c、6a、6b和6c与雷帕霉素之间相当大的相关性，PCC值分别为0.523、0.507、0.496、0.53、0.448、0.453和0.538。比较结果中的这种相似性据报道，雷帕霉素是mTOR抑制剂，其被认为是调节细胞代谢、生长和增殖的关键酶[29，30]。2.2.3. 酶法筛选选择与雷帕霉素（mTOR抑制剂）表现出最高相关性水平的化合物4a和4b，以在分子水平上探索它们的生物靶标。他们遭到在 体外 酶筛选对mTOR在结构上-相关的磷脂酰肌醇3-激酶-α（PI 3 Kα），以确定它们作为这些酶的抑制剂的潜在亲和力。文献进行调查以寻找具有错误报道的mTOR或PI3Kα活性的类似化合物[31]。结果发现，ONNHS N CH3●●●A.R. Ali等 /埃及基础与应用科学杂 志 5（2018）183-189185-ROR1a X= ClXS+H2NDMF，室温NH22-3mMNS-NH21b X=Br 1cX= BrRRO ooNNn2a cOOOOCH3CLHO2 SNNHNH2RNHHO2 SNONNHNH2NHS N CH3HDMFN2S N CHS N CH4a- c3a至 c36a至 c3SO2NHCOCH3NH2RDMFSO2NHCOCH3ONNHSN5a cCH3a，R= H; b， R= Cl;c， R= CH3方案一.化合物4-6（a-c）的合成表1最敏感细胞系的最终化合物的平均生长百分比和筛选数据表示为细胞生长百分比Comp.号NSC代码平均百分比增长增长范围白血病SR非小细胞肺癌CNS癌症SNB-75肾癌UO-31前列腺癌PC-3乳腺癌MDA- MB-231/ATCC乳腺癌T-47D4a76816296.2477.6070.2884.4071.7758.4681.3779.2684.654b76816396.9184.4281.3981.6084.5957.5387.5078.3276.614c76817896.8877.9481.7870.4473.5664.5279.4879.6688.135a76816497.8273.0875.0582.4382.3155.2484.7481.1578.495b76816599.2278.8491.8680.4387.9257.2686.6983.5382.395c76818695.9878.7789.4362.5875.5262.9473.4473.9284.246a76816696.1879.8681.7179.0287.9752.7283.7579.6189.626b76816795.5471.1392.0066.6980.0153.9280.2779.3284.056c76818799.9490.9495.0570.6973.1361.6385.5383.9885.76合成的化合物与先前的研究有几个不同之处。它们含有一个新的中心核噻唑并[3，2-a]嘧啶-5-酮，其在3-位具有芳基并且具有对于mTOR/PI 3Ka抑制活性是必需的吗啉环我们的化合物获得了相对的结构相似性，与this-唑并嘧啶酮系列具有选择性PI3Kb抑制活性[32]。此外，中心支架不直接连接至吗啉部分，而是通过亚乙基桥连接。据报道，mTOR和PI3Kα抑制剂具有共同的特征，与吗啉氧形成氢键这种互动是建立在-与mTOR中Val 2240的骨架NH在与PI3Ka中Val 882相同的位置上结合[33]。此外，酶对接研究指示的一单个氨基酸存在差异在铰链结合区附近的mTOR和PI3K建模表明，PI3K的Phe961太大而不能舒适地容纳2，6_亚乙基桥接的吗啉，导致吗啉氧从其氢键合配偶体（Val 882的主链NH）然而，在mTOR中，较小的氨基酸取代亮氨酸（Phe961Leu）产生更深的口袋，其容纳桥连吗啉而不会引起相对于相应的含吗啉化合物的显著位移。这导致对含有2，6-亚乙基桥连吗啉的类似物的选择性增加[34]。此外，据报道，PI3Kα抑制将干扰葡萄糖稳态[35]。据设想，具有从稠合杂环系统延伸的吗啉环的图4a和4 b将实现mTOR的选择性抑制剂，其与双重mTOR/PI 3 K a相比可以显示更少的副作用。抑制剂. 此外，在文献调查中，我们的化合物还在具有乙基桥连到四氢-2H-吡喃的3，4-二氢吡嗪并[2，3-b]吡嗪-2（1H）-酮中观察到。它们表现出优异的mTOR效力并保持选择性而不是相关的PI3Ka脂质激酶[36]。我们希望扩展我们的工作，发现其他支架，并在此报告我们的发现具有mTOR/PI 3 Kα抑制活性。此外，这些化合物符合Lipinski具有良好的口服生物利用度。在这些有希望的发现的鼓舞下，在Reaction Biology Corpo ration进 行 了 激 酶 测 定 ， 单 剂量浓度为100μ M，超过mTOR/PI 3Kα。186A.R. Ali等 /埃及基础与应用科学杂 志 5（2018）183-189ONNN以评价所合成的吗啉代乙基-噻唑并嘧啶酮的激酶抑制活性。关于针对mTOR的活性，化合物4a和4 b在100 μ mol/L时显示出低抑制活性。测试浓度为100μm。 同时，它们对PI3K α有中等活性，IC50值分别为120和151μm。表2显示了已知的双重mTOR/PI 3 Ka激酶抑制剂PI- 103作为阳性对照的激酶活性的抑制%和IC50值我们试图研究筛选化合物活性降低的可能原因。筛选的化合物的抑制活性降低的可能原因可能是由于非共面性。使用MMFF 94x使化合物4a和4b能量最小化，然后使用MOE.2009.10[37]进行对齐。发现通过两个碳间隔基连接至噻唑并嘧啶酮环系统的吗啉部分与中心核不共面，图1B。1.一、先前的病例报告了相同的酶，并导致活性降低发现在吡唑并嘧啶衍生物中包含四氢吡喃基支架而不是二氢吡喃基与mTOR和PI3K效力的大幅降低相关。这两个循环的不同的最低能量构象解释了活性的下降。发现二氢吡喃（DHP）环与吡唑并嘧啶核心共面，而四氢吡喃（THP）环与核心旋转约90°出平面[38]。3. 结论根据所得结果，发现合成的化合物显示出对肾UO-31的在10 μ M的剂量下具有36 - 48%的细胞生长抑制的癌细胞系。化合物4a和4b显示出中等的抗PI3Ka活性，IC50值分别为120和151mM。考虑到体外抗癌评价和激酶测定，化合物4a和4b可以被认为是进一步开发更有效的PI3Ka抑制剂的有前景的先导化合物4. 实验4.1. 一般所有试剂和溶剂均获自商业供应商，并且不经纯化即使用。在Fluka硅胶TLC铝卡（0.2mm厚）上用fluo-200监测TLC。Fig. 1.使用MMFF 94x力场，化合物4a和4b的排列能量最小化的结构显示吗啉部分与中心核的非共面性。使用不同比例的石油醚/乙酸乙酯的混合物，在254 nm处测定指示剂使用Fischer-Johns熔点装置记录熔点（°C）并且未校正。IR光谱（KBr）在Mansoura University科学学院微量分析单元的Mattson5000 FT-IR分光光度计（m以cm-1计）上记录。在Bruker 500 MHz FTNMR光谱仪上记录化合物4a、5a和6a的1H和13CNMR，并且在国家研究中心使用Varian Gemini 500 MHz FT NMR进行剩余化合物的NMR光谱。氘代二甲基亚砜（DMSOd6）用作溶剂，化学位移以d（ppm）表示，并且从四甲基硅烷（TMS）低场作为内标。在Shimadzu GC/MS QP-2010 Plus质谱仪上记录的电子轰击质谱（EI-MS）和元素分析（与计算值一致）在开罗大学理学院微量分析单位进行。抗癌评价在美国马里兰州贝塞斯达的国家癌症研究所（NCI）进行。4.2. 合成2-氨基-4-（未）取代的苯基噻唑（将苯甲酰甲基卤（苯甲酰甲基氯或苯甲酰甲基溴）1a-c（10mmol）和硫脲（0.76 g，10 mmol）在二氯甲烷（10 mL）中的混合物在室温下搅拌10 h表2化合物4a和4b对mTOR和PI3K的抑制活性和IC50值a.一化合物编号结构mTORPI3Ka%抑制bIC50（1M）c%抑制bIC50（1M）c4a方案110NDd441204b方案114NDd40151对照eO–0.091–0.001N哦a酶测定由ReactionBiology Corporation（http://www.reactionbiology.com）进行b化合物在100μMATP存在下在100 μ M下测试。 通过从100中减去%酶活性来计算抑制。c以10剂量IC50模式测试化合物，从100 μ M开始进行3倍连续稀释。 在10剂量IC50中测试的对照化合物，从10 μ M开始进行3倍系列稀释。d未确定。ePI-103（http://www.nature.com/leu/journal/v22/n9/full/leu2008144a.html）。A.R. Ali等 /埃及基础与应用科学杂 志 5（2018）183-189187在室温下搅拌DMF（10 mL）直至反应完成（2和3 min）。通过薄层色谱法监测反应进程反应完成后，将反应混合物倒入碎冰上，用过量的Na2CO3水溶液处理.通过过滤分离沉淀物并用水洗涤。产物对于所有实际目的来说足够纯（TLC上的单一斑点）。4.2.1. 4-苯基噻唑-2-胺（2a）产率：95%; mp 146熔点146℃）[19]; IR（KBr，m，cm-1）：3436（N A H），1598，1539，1516（C@ N，C @ C）。4.2.2. 4-（4-氯苯基）噻唑-2-胺（2b）产率：93%; mp 161mp 161°C）[39]。4.2.3. 4-对甲苯基噻唑-2-胺（2c）产率：94%; mp 126mp 126°C）[39]。4.3. 合成6-（2-氯乙基）-7-甲基-3-（未）取代的苯基5 H-噻唑并[3，2-a]嘧啶-5-酮（将α-乙酰基-c-丁内酯（1.08mL，10 mmol）缓慢加入到2-氨基-4-芳基噻唑2a-c（10 mmol）的三氯氧磷（15 mL）溶液中将混合物回流18 h，使其冷却并倒在碎冰上。过滤粗产物，干燥并从DMF/EtOH中结晶。4.3.1. 6-（2-氯乙基）-7-甲基-3-苯基-5H-噻唑并[3，2-a]嘧啶5-酮（3a）产率：52%; mp 138mp 136℃）[20]; IR（KBr，m，cm-1）：3079（CH芳族），2960，2915（CH脂族），1651（C@ O）、1598、1539、1499（C@ N、C@ C）。4.3.2. 6-（2-氯乙基）-3-（4-氯苯基）-7-甲基-5H-噻唑并[3，2-a]嘧啶-5-酮（3b）产率：55%; mp 156mp 1614.3.3. 6-（2-氯乙基）-7-甲基-3-对甲苯基-5H-噻唑并[3，2-a]嘧啶-5-酮（3c）产率：48%; mp 188mp 188°C）[20]。4.4. 合成化合物4-6（a-c）的一般程序将等摩尔量的6-（2-氯乙基）-7-甲基-3-（未）取代的苯基-5H-噻唑并[3，2-a]嘧啶-5-酮将反应混合物冷却至20 °C并倒入冰水中。将粗产物过滤，干燥，并从DMF/ EtOH中结晶，得到所需化合物。4.4.1. 7-甲基-6-（2-吗啉代乙基）-3-苯基-5H-噻唑并[3，2-a]嘧啶-5-酮（4a）14.4.2. 3-（4-氯苯基）-7-甲基-6-（2-吗啉代乙基）-5H-噻唑并[3，2-a]嘧啶-5-酮（4 b）产率：40%; mp 1341H NMR（400MHz，DMSO-d6）δ：2.42（s，3H，A-CH3），2.47（t，2H，-CH2CH2NA），2.71（t，2H，-CH 2 CH 2 NA），2.72（s，3H，A-CH 3），2.73（t，2H，-CH 2 CH 2 NA），2.73（t，2H，-CH 2 CH 2 NA）（t，4 H，（CH2） 2N-吗啉），3.53（t，4 H，（CH2） 2O-吗啉），7.46（d，2H，Ar-H），7.63（s，1H，H-噻唑），7.86（d，2H，Ar-H）;13C NMR（d，ppm，DMSOd6）：21.51（CH3），25.65 （ CH2CH2N ） ， 52.78 （ （ CH2 ） 2N- 吗 啉 ） ，62.88(CH2CH2N），66.75（（CH2）2O-吗啉），111.72，127.04，130.93，131.12，131.16，133.20（环matic C），154.62（噻唑并嘧啶的C7），159.25（噻唑并嘧啶的C3），160.51（C@ O），168.13（噻唑并嘧啶的ASA C（N）@NA ） ; EI-MS （ 70 eV ） m/z （ Rel. Int. ） ： 391 （ M+ +2 ，0.83）、389（M+，2.42）、278（1.28）、275（6.32）、223（3.96）、210（ 5.78 ） ， 168 （ 13.07 ） ， 114 （ 9.56 ） ; Anal.C19H20ClN3O2S（389.90）C，H，N.4.4.3. 7-甲基-6-（2-吗啉代乙基）-3-对甲苯基-5H-噻唑并[3，2-a]嘧啶-5-酮（4c）产率：31%; mp 130-吗啉），7.18（d，2 H，Ar-H），7.23（s，1H，H-噻唑），7.63（d，2H，Ar-H）; 13C NMR（d，ppm，DMSOd6）：20.87（CH3），21.11（CH3），29.53（CH2CH2 N），53.14（（CH2）2N-吗啉），56.51（CH 2CH 2 N），56.51（CH2 CH 2 N），56.51（CH2CH2 N），56.51（CH2CH 2 N），56.51（CH2 CH 2 N）66.10((CH2）2-O-吗啉），100.57,125.49,127.64、128.51、129.06 ， 129.26 ， 137.13 （ 芳 族 C ） ， 154.82 （ 噻 唑 并 嘧 啶 的C7），159.77（C@ O），168.10（噻唑并嘧啶的ASA C（N）@NA）; EI-MS（70 eV）m/z（Rel.Int.）：369（M+，14.37）、278（12.23）、255（14.17）、203（17.48）、192（19.81）、190（95.73）、176（12.62）、148（32.43），114（16.31）; Anal.对于C20H23N3O2S（369.48）C，H，N.4.4.4. N-（4-（2-（7-甲基-5-氧代-3-苯基-5H-噻唑并[3，2-a]嘧啶-6-基）乙基氨基）-苯磺酰基）乙酰胺（5a）产率：38%; mp 102ACOCH3），2.34（t，2H，ACH2CH 2NHA），2.51（s，3H，ACH3），3.43（t，2H，ACH2CH2NH-），5.88（s，1H，ACH2CH2NH-Ar），5.99（s，1H，AArSO2NHA），6.59（d，2H，NH-Ar-H-SO2 NH-），7.38（t，2H，H-Ar-噻唑），7.42（t，1H，H-Ar-噻唑），7.52（s，1H，H-噻唑），7.78（d，2 H，NH-Ar-H-SO2 NH-），7.94（d，2 H，H-Ar-噻唑）;13 CNMR（d，ppm，DMSOd6）：21.45（CH3），25.16（COCH3），29.59（CH2CH2 N），55.77（CH2CH2 N），101.31，109.04，112.59，125.67，127.87，128.39，128.89,131.91,134.31,137.15（芳香族C），148.80（纽-芳族C），156.58（噻唑并嘧啶的C7），162.27（CO），168.05（噻唑并嘧啶的ASA C（N）@NA），171.04（CO CH3）;EI-MS （ 70 eV ） m/z （ Rel. Int. ） ： 482 （ M+ ， 0.20 ） ， 439（ 0.09 ） ， 424 （ 0.19 ） ， 405 （ 0.04 ） ， 348 （ 0.05 ） ， 284（ 1.50 ） ， 160 （ 0.96 ） ， 134 （ 8.45 ） ; Anal.C23H22N4O4S2188A.R. Ali等 /埃及基础与应用科学杂 志 5（2018）183-189（482.58）C，H，N.4.4.5. N-（4-（2-（3-（4-氯苯基）-7-甲基-5-氧代-5H-噻唑并[3，2-a]嘧啶-6-基）乙基氨基）苯磺酰基）乙酰胺（5 b）产率：43%; mp 126产率：35%; mp 140-142 ℃;1H NMR（d，ppm）：2.33（t，2H，1H NMR（400MHz，DMS0-d6）δ：2.41（s，3H，A-CH3），2.44（t，2H，A-CH 2 CH 2 N A），2.59（s，3H，A-CH 3），2.44（t，2H，A-CH2CH2 NA），（t，4 H，（CH2）2N-吗啉），3.55（br s，4 H，（CH2）2O-吗啉），7.37（t，2 H，Ar-H），7.42（t，1H，Ar-H），7.75（s，1H，H-噻唑），7.94（d，2H，Ar-H）;13C NMR（d，ppm，DMSOd6）：21.90（CH3），29.53（CH2-CH N），53.16（（CH）N-吗啉），56.51（CHCHN），66.15ACOCH3），2.31（t，2H，ACH2CH 2NHA），2.45（s，3H，ACH3），3.36（t，2H，ACH2CH 2NHA），5.72（s，1H，ACH2CH2NH-Ar），5.90（s，1H，-ArSO2NHA），6.44（d，2H，NH-Ar- H-SO2 NH-），7.38（d，2H，H-Ar-噻唑），7.63（s，1H，H-噻唑），7.71（d，2 H，NH-Ar-H-SO2NHA），7.86（d，2 H，H-Ar-噻唑）;13 C NMR（d，ppm，DMSOd6）：2 2 2 2 2((CH2）2O-吗啉），102.44，109.36，125.78，127.02，128.68，133.93，137.13（芳香族C），154.82（噻唑并嘧啶的159.77（C@ O），168.13（噻唑并嘧啶的ASA C（N）@NA）; EI-MS （ 70 eV ） m/z （ Rel. Int. ） ： 355 （ M+ ， 24.35 ） ， 278（ 2.28 ） ， 255 （ 8.80 ） ， 192 （ 4.40 ） ， 176 （ 15.23 ） ， 149（ 5.31 ） ， 134 （ 20.51 ） ， 114 （ 7.76 ） ; Anal. 对于 C19H21N3O2S（355.45）C，H，N。21.75（CH3），26.50（COCH3），29.54（CH2CH2 N），59.19（CH2CH2 N），102.33 、 111.66 、 112.56 、 112.93 、 127.05 、 128.38 、 131.04 、131.09、133.14（芳香族C），147.47（噻唑并嘧啶的C3），152.42（NH-芳香族C），159.27（噻唑并嘧啶的C7），160.27（C@ O），168.78（A S A C（N）@ N A的噻唑并嘧啶），170.41（ COCH3 ） ; EI-MS （ 70 eV ） m/z （ Rel.Int. ） ： 518 （ 男 ++2 ，1.07）、516（男+，A.R. Ali等 /埃及基础与应用科学杂 志 5（2018）183-1891891.52）、473（1.07）、458（0.96）、405（1.67）、348（1.37）、318（1.30）、210（79.80），194（4.46），168（37.89）;Anal.C23H21ClN4O4S2的计算值为（517.02）C，H，N.4.4.6. N-（4-（2-（7-甲基-5-氧代-3-对甲苯基-5H-噻唑并[3，2-a]嘧啶-6-基）乙基氨基）-苯磺酰基）乙酰胺（5c）产率：35%; mp 152-D2O可交换），5.86（s，1H，-ArSO2NH-，D2O可交换），6.55（d，2H，NH-Ar-H-SO2 NH-），7.13（d，2 H，H-Ar-噻唑），7.20（d（s，1H，H-噻唑），7.49（d，2H，NH-Ar-H-SO2 NHA），7.64（d，2H，H-Ar-噻唑）;13C NMR（d，ppm，DMSOd6）：20.86（ CH3 ） ， 26.50 （ COCH3 ） ， 30.78 （ CH2CH2 N ） ， 35.81（CH3），50.57（CH2CH2 N），100.56，110.59 、112.41、112.54 、125.48 、127.62、 128.35、129.04 、129.23（芳族C），149.00（噻唑并嘧啶的C3），149.90（NH-芳族C），158.79（噻唑并嘧啶的C7），162.33（C@ O），168.09（噻唑并嘧啶的ASA C（N）@NA），170.41（CO CH3）;EI-MS （ 70 eV ） m/z （ Rel. Int. ） ： 496 （ M+ ， 15.32 ） ， 453（48.65），405（63.06），348（63.06），190（42.34），174（72.97），148（25.23）; Anal. C24H24N4O4S2（496.60）C，H，N.4.4.7. N-甲脒基-4-（2-（7-甲基-5-氧代-3-苯基-5H-噻唑并[3，2-a]嘧啶-6-基）乙基氨基）苯磺酰胺（6a）产率：41%; mp 134-1H，ACH2CH2NH-Ar），6.58（d，2H，NH-Ar-H-SO2NHA），7.04（s，1H，-ArSO2NHA），7.37（t，2H，H-Ar-噻唑），7.40（t，1H，H-Ar-噻唑），7.63（s，1H，H-噻唑），7.91（d，2 H，NH-Ar-H-SONHA），7.94 （d，2 H ，H-Ar-噻唑）;13 C NMR （d，ppm，DMSOd）：NH-），4.10（s，1H，-ArSO2 NH-C（NH）-，D2O可交换），4.53（s，2 H，H2N-C（NH）-，D2O可交换），5.99（s，1H，ACH2CH2NH-Ar，D2O可交换），6.55（d，2 H，NH-Ar- H-SO2NHA），6.98（s，1H，-ArSO2NHA），7.13（d，2 H，H-Ar-噻唑），7.20（s，1H，H-噻唑），7.64 （ d ， 2H ， H-Ar- 噻 唑 ） ， 7.79 （ d ， 2H ， NH-Ar-H-SO2NHA）;13 C NMR（d，ppm，DMSOd6）：20.81（CH3），21.10（CH3），30.78（CH2CH2-）N），59.02(CH2CH2N），100.55,112.30,125.48,一百二十五点五七，一百二十七点二七，128.35 、 129.03 、 129.22 、 129.32 、 137.15 （ 芳 香 族 C ） 、 150.00（NH-芳 族 C ） ， 158.00 （ 噻 唑 并 嘧 啶 的 C7 ） ， 158.60 （ C （ NH ）NH2），162.33（C@ O），168.08（噻唑并嘧啶的ASA C（N）@NA）; EI-MS（70 eV）m/z（Rel.Int.）：496（M+，40.00）、481（34.84）、255（ 7.10 ） ， 252 （ 37.42 ） ， 203 （ 2.58 ） ， 190 （ 50.97 ） ;Anal.C23H24N6O3S2（496.60）C，H，N.4.5. 完整NCI 60细胞组体外抗癌试验根据先前报道的标准程序[22-25]，使合成的化合物4-4.6. 酶法筛选在Reaction Biology Corporation使用HTRF（均相时间分辨荧光）测定平台进行酶测定[40]。将测试化合物溶解于100%DMS0至10mM储备液中。通过epMo进行连续稀释。化合物5070在DMSO中的溶液。 以10剂量IC 50模式测试化合物，使用PI-103作为阳性对照（20μM起始浓度），从100 μ M开始进行3倍连续稀释。 反应在10μMATP浓度下进行。非线性回归以获得标准曲线，并且使用以下进行IC50值：21.49（CH3），29.47（CH2CH2 N），59.79（CH2CH2 N），101.46，109.98，118.31、125.63、127.15、128.61、129.12、130.63、132.01、137.15（芳族C），148.80（NH-芳族C），157.75（噻唑并嘧啶的C7），159.23（C（NH）NH2），161.30（C@ O），168.17（ASA C（N）@NA噻唑并嘧啶）; EI-MS（70 eV）m/z（Rel. Int.）：482（M+，0.01），Graphpad Prism软件。4.6.1. mTOR激酶测定方案基础反应缓冲液：20 mM HEPES（pH 7.5）、10 mM MgCl2、1mM EGTA、0.02% Brij 35、0.02 mg/ml BSA、0.1 mM Na VO、2mM284（0.42），241（4.24），238（0.83），189（11.31），176（100）; Anal.34C22H22N6O3S2（482.58）C，H，N.4.4.8. N-甲脒基-4-（2-（3-（4-氯苯基）-7-甲基-5-氧代-5H-噻唑并[3，2-a]嘧啶-6-基）乙基氨基）苯磺酰胺（6 b）产率：49%; mp 148-（s，1H，ACH2CH2NH-Ar），6.54（d，2H，NH-Ar- H-SO2NH-A），7.06（s，1H，-ArSO2NHA），7.38（d，2 H，H-Ar-噻唑），7.63（s，1H，H-Ar-噻唑）噻唑），7.78（d，2H，NH-Ar-H-SO 2NHA），7.89（d，2H，H-Ar-噻唑）; 13C NMR（d，ppm，DMSOd6）：20.98（CH3），29.53（CH2CH2- N），59.20（CH2CH2 N），102.34，108.65，109.46，111.68，127.03，127.24，128.50，128.80，131.06（芳香族C），147.48（硫杂环的唑并嘧啶），148.59（NH-芳香族C），159.03（硫杂唑并嘧啶的C7），159.41（C（NH）NH2），160.21（C@ O），168.36（噻唑并嘧啶的ASAAC（N）@NA）; EI-MS（70 eV）m/z（Rel.Int.）：518（M+ +2，0.31）、516（M+，0.27）、481（0.26）、318（0.34）、275（0.59），272（0.37），223（1.57），210（100）; Anal.C22H21ClN6O3S2（517.02）C，H，N.4.4.9. N-甲脒基-4-（2-（7-甲基-5-氧代-3-对甲苯基-5H-噻唑并[3，2-a]嘧啶-6-基）乙基氨基）苯磺酰胺（6c）产率：35%; mp 168A-CH2CH2 N-和Ar-CH3），2.40（s，3H，A-CH3），3.32（t，2H，A-CH2CH2-190A.R. Ali等 /埃及基础与应用科学杂 志 5（2018）183-189DTT，1% DMSO。反应程序：在新鲜制备的基础反应缓冲液中制备底物将所需辅因子以反应中2mM的终浓度递送至上述底物溶液。将mTOR/FRAP 1激酶递送到底物溶液中并轻轻混合直至反应中的最终浓度为300 nM。通过Acoustic technol将化合物4a和4b在100%DMSO中递送到激酶反应混合物中ogy（Echo 550;纳升范围），并在室温下孵育20分钟。将33P-ATP（比活度10μCi/l）递送到反应混合物中以引发反应。之后，com-在室温下孵育2h。滤纸结合法检测激酶活性。4.6.2. PI 3 Ka（p110a/p85a）激酶测定方案反应缓冲液：HEPES 50 mM（pH 7.0），NaN3 0.02%，BSA0.01%，原钒酸盐0.1 mM，1% DMSO。检测缓冲液：HEPES 10mM（pH 7.0），BSA 0.02%，KF 0.16 M，EDTA 4 mM。 反应程序：在新鲜制备的反应缓冲液中制备PIP2底物（
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